斑馬魚胚胎體節(jié)表面張力對胚胎左右對稱的影響
發(fā)布時間:
2022-05-16
脊椎動物胚胎體軸周期性地分段形成左右對稱的體節(jié)。體節(jié)是一種三維的多細胞結構,其外層包括上皮層和由前體節(jié)中胚層(PSM)發(fā)育而來的前富含纖維結合蛋白的胞外基質構成。體節(jié)的長度、定位和左右對稱特征的決定要早于體節(jié)形態(tài)形成,即體節(jié)性狀決定早在未分段的PSM階段就已經確定了。研究表明胚胎發(fā)育過程中的機械力與體節(jié)形態(tài)發(fā)生相關。然而,受限于研究技術手段,對機械力是如何影響胚胎體節(jié)性狀決定的問題,還有待研究。
近日,Sundar R. A等利用光片機圖像投影技術,研究了機械力在斑馬魚胚胎體節(jié)性狀決定與體節(jié)形態(tài)發(fā)生中的作用。他們測量了體節(jié)1至6的長度(LAP),發(fā)現(xiàn)體節(jié)長度不等,隨后測量了mespb基因(體節(jié)長度標記基因)表達條帶的間距。發(fā)現(xiàn)LAP的變化與mespb條帶間距的變化非常類似。暗示LAP受到mespb的調控。當體節(jié)形成后的一個小時內,LAP趨于一致。通過比較前端體節(jié)的形成起始時間和發(fā)育2小時的LAP,發(fā)現(xiàn)這些體節(jié)的LAP約為51微米(稱為L0AP)。L0AP是體節(jié)的發(fā)育目標長度。

為了闡明前端體節(jié)LAP的調整機理,研究人員首先研究了體節(jié)雙側的LAP是否相互影響。通過實驗,未發(fā)現(xiàn)存在顯著的相互影響。接著他們研究了雙側體節(jié)的正確形成是否影響LAP的調整。通過共注射顯性抑制fibronectin 1a 和1b mRNA進入2細胞期斑馬魚胚胎,干擾單側體節(jié)的形成。實驗結果表明LAP的調整獨立于體節(jié)對稱側的狀態(tài)。
研究人員進一步研究了在體節(jié)形成后一個小時內,LAP的調整是否伴隨有細胞數(shù)量或體節(jié)體積變化的發(fā)生。實驗結果表明細胞數(shù)量或體節(jié)體積的變化與LAP的調整沒有相關性,即細胞數(shù)量和體節(jié)體積的變化對LAP的調整沒有影響。
體節(jié)二維結構的變化是否是LAP的調整原因。研究人員使用光片機圖像投影技術定量測量了胚胎體節(jié)3D結構變化,觀察到體節(jié)中外側(ML)的長度隨著時間縮短,而背腹側(DV)的長度則增長,起始LAP與ML長度呈現(xiàn)正相關性,即當體節(jié)起始LAP小于或者大于L0AP時,體節(jié)可以通過調整ML長度,使起始LAP趨向L0AP。DV長度變化對LAP的調整沒有影響。實驗結果表明LAP受驅動體節(jié)形態(tài)變化的機械力調控。
研究人員建立了關于LAP調整的數(shù)學模型,
。為了理解機械力是如何影響LAP的調整,他們通過胚胎體節(jié)體外培養(yǎng)技術,研究了體節(jié)間的接觸壓力,由體節(jié)外基質和體節(jié)表層細胞引起的表面張力,以及體節(jié)膨脹的機械力與LAP調整的關系。結果表明體節(jié)間的接觸壓力和體節(jié)膨脹的機械力都對LAP的調整沒有影響。由體節(jié)外基質和體節(jié)表層細胞產生的表面張力是LAP調整的主要因素。

為了進一步論證體節(jié)外基質和體節(jié)上層細胞產生的表面張力是LAP調整的主要因素這一結論,研究人員通過向1細胞期斑馬魚胚胎中注射嗎啉代(morpholinos)(瞬時影響 fibronectin 1a和1b、integrinα5的表達),以及注射RGD多肽,干擾體節(jié)的表面張力。實驗結果表明干擾體節(jié)表面張力相關的分子可以減少LAP的調整。研究人員又研究了體節(jié)的分段與LAP調整的關系。通過對her1;her7 突變品系,和使用DAPT干擾delta–notch信號通道的一系列的實驗表明體節(jié)的分段對LAP的調整沒有影響。
研究人員研究了單側體節(jié)LAP對體節(jié)兩側對稱的影響,即LAP調整是否可以確保體節(jié)左右對稱,以及體節(jié)沿著體軸分段邊界的定位。實驗結果表明當兩側體節(jié)形成時,體節(jié)的前端邊界是對稱的。體節(jié)長度的不對稱主要是由新近形成的體節(jié)的邊界不對稱定位造成了。體節(jié)長度的調整影響體節(jié)后端邊界定位,確保體節(jié)兩側的長度和邊界定位的左右對稱。
基于以上的實驗結果,研究人員最后得出結論:體節(jié)的表面張力促進了單側體節(jié)的長度調整,單側體節(jié)長度的調整進一步地保證了體節(jié)的兩側對稱的結論。