一般推薦MO+CRISPRi兩種策略去同時敲降一個基因,由于MO是在轉(zhuǎn)錄后水平上敲降基因的功能,而CRISPRi是在轉(zhuǎn)錄水平上敲降基因的功能,使用兩種獨立的、原理完全不同的敲降方法,如果給出的敲降效果(表型)是一樣的,那么這樣建立的敲降方法可以被認可是有效且特異的。請大家注意:評價基因敲降效果需要從有效和特異兩個方面來考慮。有效性問題:CRISPRi敲降的有效性可以通過RT-PCR法檢測目標基因表
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以基因編輯Crispr/Cas9工具構(gòu)建斑馬魚敲除/敲入模型
Crispr/Cas9技術(shù)簡單、高效,且沒有物種限制,現(xiàn)已廣泛應用于人、大小鼠、斑馬魚、果蠅、豬、羊、水稻、小麥等動植物,為動植物品種改良、疾病模型建立以及基因治療等不同領(lǐng)域開展基礎(chǔ)研究與應用研究的遺傳工程利器。
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